Агар висмут-сульфитный (Bismuth Sulfite Agar (Wilson Blair)

Электронная почта
Среда для высокоселективного выделения сальмонелл, в частности, Salmonella typhi, из клинических образцов и пищевых продуктов
Описание

Кат. № 1011

Фасовка 500 г. Срок годности 4 года.
Хранить при температуре 20°С

Агар висмут-сульфитный

Bismuth Sulfite Agar
(Wilson Blair)

Среда для высокоселективного выделения сальмонелл, в частности, Salmonella typhi,
из клинических образцов и пищевых продуктов

Формула в граммах на литр

Бактериологический пептон 10,0 Висмут-сульфитный индикатор 8,0

Мясной экстракт 5,0 Декстроза 5,0

Na2HPO4 4,0 Сульфат железа 0,3

Бриллиантовый зеленый 0,025 Бактериологический агар 20,0

Конечная величина pH 7,5±0,2 при 25°C

Приготовление

Развести 52,3 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Хорошо перемешать и нагреть. При частом помешивании довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. НЕ ПЕРЕГРЕВАТЬ! НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ! Охладить среду до 45°C (ОЧЕНЬ ВАЖНО!), тщательно перемешать и разлить в чашки Петри. Готовая среда должна быть матово-белой с зеленым оттенком и храниться при 8–15°C.

Использование

Агар висмут-сульфитный – модификация среды Вильсона-Блэйра (Wilson Blair Medium), которая широко используется в повседневной практике для обнаружения большинства видов рода Salmonella, в частности, Salmonella typhi.

Пептон и мясной экстракты являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микро­организмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Декстроза – ферментируемый углевод, ис­точник углерода и энергии. Висмут-сульфитный индикатор и бриллиантовый зеленый – ингибиторы грамполо­жительных бактерий и бактерий группы кишечной палочки. Гидрофосфат натрия выступает в роли буферной системы. В присутствии H2S Salmonella spp. восстанавливают соли железа до сульфида железа, в результате чего колонии окрашиваются в черный цвет, а висмутовый индикатор превращается в металлический висмут, образующий блестящий ореол вокруг колоний.

Обычно Агар висмут-сульфитный инокулируется путем засева поверхности штрихом для получения изолированных колоний, но можно также смешивать пробы с жидкой средой и заливать чашки, после чего дать среде затвердеть. Все чашки инкубируются 40–48 часов при 35±2°C. Внешний вид чашек с затвердевшей сре­дой должен быть однородным, матовым, от кремового до бледно-зеленого цвета. При хранении в холодильнике среда будет медленно окисляться. Рекомендуется хранить чашки со средой в холодильнике в течение 4 дней перед использованием, чтобы ослабить ингибирование и, таким образом, получить возможность выделять сальмонеллы в образцах с относительно небольшим количеством сопутствующей микрофлоры.

Колонии S. typhi имеют черную окраску, окружены черной или коричневатой зоной, с металлическим блеском. В областях интенсивного роста они могут выглядеть как светло-зеленые колонии. Другие штаммы Salmonella spp. образуют колонии от черного до зеленого цвета, с небольшим потемнением среды вокруг или без такового. Shigella spp. не растут, кроме Shigella flexneri и Shigella sonnei. Колонии, которые они образуют, имеют цвет от коричневого до зеленого, они выпуклые, внешне напоминают кратер. E. сoli частично ингиби­руется, местами появляясь в виде коричневых или зеленоватых блестящих колоний. Некоторые штаммы Enterobacter spp. могут образовывать выпуклые, слизистые колонии, имеющие серебристый блеск (светлее, чем у S. typhi). Колимформы, образующие сероводород, формируют колонии, по виду похожие на S. typhi. Их легко отличить по выделению газа на лактозных средах, например, Агаре трехсахарном с железом (кат. №1046) или Агаре Клиглера с железом (кат. № 1042).

Микробиологический тест

Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 40–48 часов.

Микроорганизмы

Рост

Цвет колонии

Escherichia coli ATCC 25922

Частично ингибируется

Коричнево-зеленый

Salmonella typhi ATCC 19430

Хороший

Яркий металлический черный

Shigella flexneri ATCC 12022

Частично ингибируется

Коричневый

Salmonella enteritidis ATCC 13076

Хороший

Яркий металлический черный

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Ингибируется