Агар для определения ДНКазы (DNAse Test Agar)
активности дезоксирибонуклеазы
Агар для определения ДНКазы DNAse Test Agar |
Кат. № 1028 Фасовка 500 г. Срок годности 4 года. |
Среда для идентификации бактерий из клинических образцов на основании
активности дезоксирибонуклеазы
Формула в граммах на литр
Казеиновый пептон 15,0 Соевый пептон 5,0
Хлорид натрия 5,0 Дезоксирибонуклеиновая кислота 2,0
Бактериологический агар 15,0
Конечная величина pH 7,3±0,2 при 25°C
Приготовление
Развести 42 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Тщательно перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Стерилизовать 15 минут при 121°C. Охладить до 45–50°C, тщательно перемешать и разлить в чашки Петри. Готовая среда имеет янтарный цвет, слегка опалесцирует, должна храниться при 8–15°C.
Использование
Агар для определения ДНКазы применяется для дифференциации микроорганизмов с использованием соотношения между коагулазо-положительной и ДНКазной активностью. Особенно эта дифференциальная среда рекомендуется для идентификации патогенных стафилококков.
Казеиновый и соевый пептоны являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Дезоксирибонуклеиновая кислота дает возможность обнаружения ДНКазы, которая ее деполимеризует.
Посеять тестируемый материал широкополосным штрихом (длиной 2 см) на поверхности чашки. На одну и ту же чашку можно одновременно нанести 4–5 разных образцов. Инкубировать 18–24 часа при 35±2°C.
Получив колонии, добавить одну каплю 1 N соляной кислоты или несколько капель 0,1% раствора толуидинового синего. Для некоторых штаммов необходимо увеличивать концентрацию HCl до 2 N для получения хорошей положительной реакции.
В присутствии разбавленной соляной кислоты в результате реакции с ДНК в среде культивирования образуется мутный осадок. Колонии микроорганизмов, продуцирующих дезоксирибонуклеазу, будут окружены прозрачной зоной, содержащими фракции растворимых нуклеотидов деградированной ДНК, которые не осаждаются соляной кислотой. Толуидиновый синий формирует окрашенные комплексы с полимеризованной ДНК.
Результаты
В присутствии соляной кислоты:
ДНКазо-положительный тест:
прозрачная зона, окружающая посевной штрих, причем остальная часть чашки остается матовой. Для формирования положительной реакции нужно приблизительно 5 минут.
ДНКазо-отрицательный тест:
отсутствие прозрачной зоны вокруг посевного штриха.
В присутствии толуидинового синего:
ДНКазо-положительный тест:
появление розового ореола вокруг посевного штриха. Остальная часть чашки остается синей.
ДНКазо-отрицательный тест:
отсутствие розового ореола вокруг посевного штриха.
Для некоторых требовательных организмов может оказаться необходимым добавление крови. При добавлении разбавленной соляной кислоты образуется четкий матовый ореол вокруг ДНКазо-положительных организмов. ДНКазная среда с кровью не должна использоваться при изучении гемолитических реакций, и кровь следует добавлять только в случае крайней необходимости.
Микробиологический тест
Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 18–24 часа.
Микроорганизмы |
Рост |
Прозрачность при ДНКазном тесте |
Staphylococcus aureus ATCC 6538 |
Хороший |
+ |
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 |
Хороший |
– |
Staphylococcus aureus ATCC 25923 |
Хороший |
+ |
Serratia marcescens ATCC 8100 |
Хороший |
+ |